家蚕生物反应器
2008-7
浙江大学出版社
张耀洲
332
无
近几年，我们实验室在国内外率先利用蚕蛹作为生物反应器进行蛋白药物产业化研究，开拓了生物制药的新途径，尤其是蛋白口服化的研究成果，尤为引人注目。由于目前国际上生物技术工业界常用大肠杆菌和酵母表达制备药物，这一技术路线从实验室研究到中试和产业化生产都比较成熟，但对于家蚕生物反应器却没有现成的技术路线可能套用。为此，我们对家蚕表达的技术体系、规模化生产工艺、高纯度产品的制备技术、产品质控、家蚕表达技术体系安全性评价、制造和质检标准的制定和蛋白质口服相关的蛋白质功能等关键技术均进行了深入的研究，并取得了一定的研究成果。 本书共分为五个章节，主要包括家蚕的分子生物学、核多型角体病毒为载体的昆虫表达系统、家蚕胚胎细胞系的构建、家蚕生物瓜器及其就用、家蚕生物反应器的应用前景五方面的内容。实现对家蚕生物反应器的系统论述，对推广和推动家蚕生物反应器产业化具有重要的意义。
第一章 家蚕的分子生物学 第一节 家蚕的生物学特性 1 生活史 2 蚕的外部形态 3 家蚕的生长与发育 4 养蚕的环境标准 第二节 杆状病毒基因组学 1 杆状病毒及其侵染机制 2 杆状病毒基因组学研究 3 杆状病毒基因结构与功能 第三节 蚕蛹的小RNA研究 1 蚕蛹小RNA的研究 2 蛹mRNA—like小RNA的研究 第四节 家蚕蛹cDNA文库的构建和蛋白质组学 1 家蚕蛹cDNA文库的构建 2 家蚕蛹蛋白质组学 第五节 基于家蚕杆状病毒表面展示技术的膜蛋白组学 1 基于家蚕杆状病毒表面展示技术分离膜蛋白的方法第二章 以核型多角体病毒为载体的昆虫表达系统 第一节 昆虫细胞/NPV表达系统的原理和经典操作方法 1 原理 2 转移载体质粒的构建 3 重组病毒的组建和筛选 第二节 最新发展的改进型操作方法 1 NPV DNA线性化 2 NPV DNA线性化并删除0RF1629 在S.cerevisiae中YAC介导的NPV重组 4 在E.coli中转座子介导的NPV重组 5 体外定点重组 6 Bac to Bac系统 7 杆状病毒表面展示技术 第三节 外源基因的表达、转录及转译后加工 1 真核生物、病毒、细菌、霉菌等多种来源基因的表达 2 转录后加工 3 糖基化 4 磷酸化、脂肪酰化和酰胺化 5 蛋白水解 6 细胞内定位和分泌 7 高级结构的形成 第四节 昆虫细胞NPV表达系统的优越性和缺陷 1 昆虫细胞/NPV表达系统的优越性 2 家蚕/BmNPV表达系统相对于Sf细胞/AcMNPV表达系统的优势 第五节 BmBacPAK病毒的组建 1 BmBacPAK病毒的组建技术 2 BmBacPAK病毒 第六节 BmBQcPAK载体病毒在家蚕细胞中进行报告基因的表达 1 质粒的构建 第七节 家蚕核型多角体病毒p26基因及同源重复l又hr3的克隆和序列分析 第八节 家蚕核型多角体病毒同源重复Nhr5的克隆和序列分析 1 BmNPV DNA Kpn I—D片段的克隆及两端序列分析 2 BmNPV hr5全序列分析 第九节 BmNPV hr5的重复起始区功能 1 含BmNPV hr5结构的质粒在BmNPV感染的BmN细胞中的复制 2 pBhr5和pBhr5 3质粒在AcMNPV感染的Sf21细胞中的复制 3 AcMNPV的hr序列是一种增强子 4 不同NPV在不同宿主细胞中功能和结构不同 ……第三章 家蚕组织细胞系的构建第四章 家蚕生物反应器及其应用第五章 家蚕生物反应器的应用前景第六章 家蚕生物反应器生产生物制品的标准参考文献
无