医学免疫学实验技术
2011-2
苏州大学出版社
居颂光，朱一蓓 主编
98
《医学免疫学实验技术》是在总结多年免疫学实验教学以及借鉴众多编者多年来在国内外所从事的科研工作的经验基础上，编写而成的。全书共收录了免疫学相关实验34个。表述条理清晰，简明扼要。每一实验包括目的要求、原理、材料、方法、注意事项及思考题六个部分，并尽可能给出直观、形象的结果与分析，使读者能够全面掌握实验内容，了解实验过程中的关键操作及需要注意的事项，从而收到知其然并知其所以然的学习效果。书后附有实验常用?剂的配方以供查阅参考。
本书是一本供高等医学院校本科生、研究生以及其他相关人员使用和参考的实验技术指导教材。
实验一外周血单个核细胞的分离
实验二T淋巴细胞亚群的测定
实验三MTT法检测淋巴细胞增殖
实验四WST-8／CCK-8法检测细胞增殖
实验五CFSE标记检测T细胞增殖
实验六混合淋巴细胞反应
实验七软琼脂集落形成实验
实验八51Cr释放法测定CTL?性
实验九细胞周期测定
实验十细胞迁移能力分析
实验十一流式细胞术检测细胞膜抗原
实验十二激光共聚焦扫描显微镜技术分析细胞膜分子共定位
实验十三流式细胞术检测胞内抗原
实验十四免疫组织化学染色法
实验十五ELISA法检测细胞因子含量
实验十六酶联免疫斑点分析
实验十七细胞传代培养
实验十八细胞冻存与复苏
实验十九支原体?染的检测与预防
实验三十人外周血单核细胞来源树突状细胞的制备
实验二十一小鼠腹腔细胞及巨噬细胞的制备
实验二十二小鼠脾细胞来源NK细胞的制备
实验二十三小鼠胸腺来源NKT细胞的培养和检测
实验二十四小鼠肝脏淋巴细胞的分离
实验二十五肿瘤浸润T细胞的分离
实验二十六小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的制备
实验二十七兔抗人IgG多克隆抗体的制备
实验二十八B淋巴细胞杂交?的建株
实验二十九单克隆抗体的分离纯化
实验三十免疫印迹实验
实验三十一免疫沉淀技术
实验三十二荷瘤动物模型的建立
实验三十三小鼠GVHD模型的建立
实验三十四胶原性关节炎模型的建立
附录：免疫学实验常用试剂及其配制方法
版权页： 插图： 一、目的要求 1.掌握混合淋巴细胞培养的原理和操作步骤。 2.熟悉混合淋巴细胞反应的应用及意义。 二、原理 混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction，MLR）又称混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture，MLC），是指当两个无关个体、功能正常的淋巴细胞在体外混合培养时，由于HLA Ⅱ类抗原，尤其是HIA—D抗原不同，可相互刺激对方的T细胞发生增殖，此为双向混合淋巴细胞培养（two way MLC）；若将其中一方的淋巴细胞先用丝裂霉素C（mitomycin C）处理或射线照射使细胞中DNA失去复制能力，但仍能刺激另一方淋巴细胞发生转化，称为单向混合淋巴细胞培养（one way MLC），两个个体间HLA抗原差异程度越大，反应越强烈，可通过细胞数量、形态检查或3H—TdR掺入率检测反应细胞的增殖水平。如用经照射的、已知D位点抗原的纯合子分型细胞（Homozygous typing cell，HTC）作为刺激细胞，则可检测待检者的D位点抗原型别。若待检者抗原与标准HIJA—D抗原相同，MLC不发生增殖，此为HLA D抗原阴性分型法。 混合淋巴细胞反应（MLR）常用于器官移植前的组织配型，以测定受体和供体主要组织相容性抗原（HLA）相容的程度，由于MLC中淋巴细胞接受同种异型抗原的刺激而发生活化、增殖，产生种类众多的细胞因子，促进NK、LAK和CTL等杀伤细胞的分化，因此，又是免疫调节研究中常用的实验模型。 三、材料 1.待测细胞：供者和受者的淋巴细胞悬液，具体制备方法参见实验一。 2.细胞培养基：含10％FCS的RPMI 1640。 3.pH 7.2，0.01 mol／L PBS。 4.丝裂霉素C 30 μg／mL。 5.CO2培养箱、超净台。 6.96孔细胞培养板。 7.3H—TdR工作液：最好选用放射比活性为74～370 MBq／mmol的制品，将1 mCi／mL的溶液用无菌生理盐水稀释20倍，4℃保存，用时每孔加20 μL。 8.无水乙醇。 9.闪烁液。 10.49型玻璃纤维纸。 11.液体闪烁仪。 12.细胞培养瓶、滴管、吸管等。 四、方法 1.刺激细胞的准备：本实验采用的刺激细胞为供者的外周血淋巴细胞，取新鲜分离的PBMC细胞，离心后重悬于新鲜完全培养基中，调整细胞密度为（1～2）×106个／mL，移置塑料培养瓶或50 mL离心管中，加入30 μg／ml，的丝裂霉素c，37℃水浴30 min。1 000 r／min离心10 min，弃上清，用0.01 mol／L PBS洗涤2次，每次1 000 r／min离心10 min，弃上清，细胞沉淀重悬于新鲜完全培养基中，调整细胞密度为（1～2）×106个／mL。 2.反应细胞的准备：分离纯化待检个体的PBMC（方法参见实验一），用含10％FCS的RPMI 1640调整细胞密度为（1～2）×106个／mL。
《医学免疫学实验技术》是一本供高等医学院校本科生、研究生以及其他相关人员使用和参考的实验技术指导教材。
相当不错相当不错相当不错