医学生物化学实验技术
2002-10
武汉大学出版社
汪炳华 编
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《医学生物化学实验技术》是根据医学生物化学教学大纲编写的，可供临床医学、口腔、护理、儿科、检验和药学等专业五年制及七年制本科生使用，内容包括吸收光谱法、电泳法、层析法、酶学分析及常用分子生物学实验技术。在介绍各项生物化学实验技术基本理论的基础上，选择了32个有代表性的实验供教学时选用。
第一章 吸收光谱法第一节 吸收光谱第二节 光吸收的基本定律——Lamber-Beer定律第三节 分光光度计简介第四节 吸收光谱法的应用实验一 血红蛋白和氧合血红蛋白吸收光谱的测定实验二 血液葡萄糖测定（邻甲苯胺法）实验三 蛋白质含量的测定实验四 血清胆固醇的测定（氯化铁法）实验五 RNA含量的测定实验六 DNA含量的测定实验七 血清过氧化脂质的测定第二章 电泳技术第一节 电泳的基本原理第二节 影响电泳速度的因素第三节 常用的电泳支持介质第四节 电泳后的染色实验八 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳实验九 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验十 血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳实验十一 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分子量实验十二 聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测定蛋白质的分子量实验十三 等电聚焦电泳测定蛋白质的等电点实验十四 血清载脂蛋白B的免疫定量测定（单向火箭免疫电泳法）第三章 层析法第一节 概述第二节 吸附层析第三节 分配层析第四节 离子交换层析第五节 凝胶层析第六节 亲和层析实验十五 氨基酸的纸层析实验十六 糖的薄层层析实验十七 凝胶层析分离血红蛋白与鱼精蛋白实验十八 离子交换层析分离混合氨基酸实验十九 亲和层析法分离人血浆纤溶酶原实验二十 血浆免疫球蛋白IgG的分离提纯与鉴定第四章 酶学分析第一节 酶的分离纯化第二节 酶的活力测定第三节 酶促反应动力学第四节 酶法分析第五节 同工酶第六节 酶在医学上的应用实验二十一 血清谷-丙转氨酶（ALT）活性的测定（改良Mohun法）实验二十二 血清乳酸脱氢酶活性的测定实验二十三 底物浓度对酶活性的影响——碱性磷酸酶Km值的测定实验二十四 酶法测定血清胆固醇含量实验二十五 酶法测定血液葡萄糖含量实验二十六 血清乳酸脱氢酶同工酶测定——琼脂糖凝胶电泳法第五章 分子生物学实验基本技术第一节 核酸分离提取的原则第二节 核酸分离提取的基本方法第三节 核酸的鉴定第四节 限制性核酸内切酶及其应用实验二十七 外周血白细胞DNA的提取（NaI法）实验二十八 真核基因组DNA的分离纯化实验二十九 DNA的琼脂糖凝胶电泳实验三十 质粒DNA的小量快速制备（碱变性裂解法）实验三十一 质粒DNA的限制性内切酶消化酶解实验三十二 真核组织RNA的制备附录一 生物化学实验守则附录二 玻璃仪器的洗涤与干燥附录三 生化实验样品的制备附录四 试剂的分级、配制与保存附录五 常用缓冲液的配制方法附录六 易变质及特殊试剂的保存方法附录七 一些常见蛋白质分子量参考值附录八 一些常见蛋白质等电点参考值
一、酶的分离 1.材料的选取 在酶的分离过程中，首先应该考虑的一个问题是如何选择材料。同一种酶在不同组织细胞中的含量可能相差千倍或上万倍，因此，如果不是对某种酶在各组织中的含量进行比较分析或是某些特殊需要，一般选择含量丰富的材料进行提纯。 2.细胞的破碎 常用的细胞破碎方法有：（1）绞碎、匀浆、高速组织捣碎机捣碎等；（2）对于细胞壁较厚的微生物材料，通常采用加石英砂研磨、超声波破碎、反复冻融等方法；（3）对于细胞膜上的酶还可以采用有机溶剂处理、去垢剂处理等。 从组织中抽提所需要的酶往往用缓冲液抽提，这样可以避免由于pH的突然变化而导致酶的失活。低温（0～4摄氏度）操作更宜。 二、酶的纯化 随着科学技术水平的不断提高，酶的分离纯化手段也不断增加，尽管方法多样，但大致可归纳为以下几类： 1.沉淀法 常用的有盐析法、聚乙二醇沉淀法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、热变性沉淀法等。 ……
